一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?span>

本研究利用固相萃取法作為樣品的前處理方法，LC-MS/MS法作為檢測(cè)手段。該方法可簡(jiǎn)化樣品的前處理過(guò)程，節(jié)省有機(jī)溶劑的使用，操作簡(jiǎn)便。

二、實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)物

氯霉素(CAS:56-75-7)。

三、應(yīng)用范圍

本方法適用于動(dòng)物源性食品中氯霉素的LC-MS/MS檢測(cè)及確證。

四、參考標(biāo)準(zhǔn)

《GB/T 22338-2008動(dòng)物源性食品中氯霉素類(lèi)藥物殘留量測(cè)定》。

五、實(shí)驗(yàn)材料

SimplyGreen C18固相萃取柱1000mg/6mL(Cat.No.)。

六、實(shí)驗(yàn)方法

1、樣品提取

將稱(chēng)取5 g豬肉試樣，精確到0.01 g。置于50 mL離心管中，加入5 mL水，于渦旋混合器上快速混合1 min，使試樣完全溶解。準(zhǔn)確加入15mL乙酸乙酯，在振蕩器上振蕩10 min，以3000r/min離心10 min，準(zhǔn)確吸取上層乙酸乙酯12 mL轉(zhuǎn)入15 mL的離心管中，置于濃縮吹氮儀在45 ℃吹掃蒸干，加入5 mL水溶解，待凈化。

2、SPE柱凈化

(1)活化：依次采用5 mL甲醇、5 mL水活化C18固相萃取柱。

(2)凈化：將提取液過(guò)C18固相萃取柱，待溶液完全流出后，用2×3 mL水過(guò)柱，然后再用5 mL乙腈:水(2:8, v/v)淋洗柱，棄去全部淋出液。用真空泵減壓抽干10 min。

(3)洗脫：用6 mL乙酸乙酯洗脫，收集洗脫液于10 mL離心管中，于45℃用氮?dú)獯蹈梢捍蹈?，用乙?span>:水(2:8, v/v)定容至1 mL，供LC-MS/MS上機(jī)測(cè)定。

3、LC-MS/MS條件

色譜柱：Venusil ASB C18(2.1×150mm，5 μm)

質(zhì)譜儀：API 4000

流動(dòng)相：A:10 mmol/L乙酸銨溶液  B: 甲醇

流速：0.2 mL/min

柱溫：40 ℃

進(jìn)樣體積:5 μL

離子源：電噴霧(ESI)，負(fù)離子模式

檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)

表1 質(zhì)譜儀離子源參數(shù)

表2 氯霉素及內(nèi)標(biāo)的母離子和子離子參數(shù)表

2、添加水平為2μg/kg豬肉基質(zhì)中氯霉素檢測(cè)色譜圖

圖1 氯霉素及內(nèi)標(biāo)氯霉素-D5總離子流圖          圖2 氯霉素(CAP )(320.9/151.9)質(zhì)譜圖